使用液相色譜儀的小伙伴肯定會(huì )遇到漏氣和漏液的狀況，流動(dòng)相是造成液相色譜各種問(wèn)題的***主要源頭。液相色譜***常見(jiàn)的故障一是堵，二是漏。今天***這兩部分別展開(kāi)討論（流動(dòng)相以甲醇為例，色譜柱以C18為例）。

首先，為何會(huì )堵?“堵”的表現現象***是柱壓異常升高，直接原因***是流路不暢。堵塞的主要位置***是在色譜柱的前端，***主要原因***是流動(dòng)相里有雜質(zhì)，雜質(zhì)的主要來(lái)源***是細菌。

1純水中的細菌污染

首先我們要認識到，一般的國產(chǎn)甲醇其實(shí)不需要額外過(guò)濾處理，直接使用沒(méi)有問(wèn)題。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì)，也能在液相流路系統***前端的過(guò)濾頭上排除，真正容易引起問(wèn)題的，是水中的細菌。新制備的純水在室內放置幾天***會(huì )長(cháng)菌，而這些細菌雖然肉眼不可見(jiàn)，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。這***是在配制流動(dòng)相時(shí)造成的細菌污染的原因，解決它的方法很簡(jiǎn)單，***是確保水的******性。

解決辦法：

（1）***理想的方式當然是購買(mǎi)實(shí)驗室專(zhuān)用純水機，既方便又******，質(zhì)量也放心。******的缺點(diǎn)***是******不菲。

（2）成箱購買(mǎi)市售品牌純凈水，如500ml的怡寶或娃哈哈，這些水的質(zhì)量足以應付液相色譜的要求。先隨機抽取一瓶做一下細菌平板實(shí)驗，待菌落數合格方可使用。這樣每次只要單獨開(kāi)一瓶即可，也很方便。每次成本2元左右。這里特別指出一個(gè)細節：在絕大多數書(shū)本上，凡談到配制流動(dòng)相都會(huì )談到***后一個(gè)過(guò)濾的步驟。但是從我們長(cháng)期使用的實(shí)際效果來(lái)說(shuō)，只要能******水的質(zhì)量，這一步******可以也應當去除。

水有******，可以不過(guò)濾？

（1）流動(dòng)相過(guò)濾在理論上有好處，但是實(shí)際操作時(shí)由于不可能做到專(zhuān)瓶專(zhuān)用，反而容易造成的交叉污染，對于配比復雜的流動(dòng)相影響更大。

（2）流動(dòng)相過(guò)濾在經(jīng)濟成本上不劃算。買(mǎi)一套過(guò)濾裝置要6000多元，且過(guò)濾器公認是比較容易損壞的設備。***主要是過(guò)濾片的成本太高，一片***要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過(guò)濾片的成本會(huì )遠遠高于色譜柱的成本上升。

2流動(dòng)相的細菌污染

流動(dòng)相剛開(kāi)始不長(cháng)菌，在使用時(shí)卻產(chǎn)生了細菌污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時(shí)的一種不良使用習慣造成的。舉***簡(jiǎn)單的例子：50%的甲醇水流動(dòng)相，有兩種使用方式。一種方式是在上機前***配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純甲醇，流路B放純水。從單純實(shí)驗效果來(lái)說(shuō)，后一種有明顯的優(yōu)點(diǎn)：首先是簡(jiǎn)單，不需要實(shí)驗者另個(gè)計算配比混合，其次***是比例******，能得到保留時(shí)間重復性極好實(shí)驗效果。

但是，它有一個(gè)致命的缺陷，***是純水在流動(dòng)相瓶中幾天時(shí)間***會(huì )長(cháng)細菌（很多情況下不僅僅用純水作流動(dòng)相，而是用緩沖鹽溶液，本身***是******肥料，細菌長(cháng)得更迅速），一旦有細菌柱子***壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實(shí)驗都要用新制備的純水，更要求在每次實(shí)驗后把水相換掉，換成甲醇沖洗干凈，這一點(diǎn)在實(shí)際工作中很多人意識不強，***是意識到了但多次使用中總有一兩次會(huì )遺漏，但是往往這一兩次***足以產(chǎn)生致命的影響。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的。

所以，寧可犧牲小小的保留時(shí)間的重復性，也不要用純水溶液作為流動(dòng)相。從實(shí)際實(shí)驗效果來(lái)說(shuō)，我建議用10%的甲醇水代替水溶液（以前我做過(guò)不同比例甲醇水的細菌總數實(shí)驗，在5%***基本可以抑菌，在10%及以上***可以******殺菌了），這樣可以有效排除長(cháng)細菌的隱患，既可作流動(dòng)相，也可沖柱。***算是在配制流動(dòng)相時(shí)會(huì )計算得麻煩一些，但是一次麻煩，終身受益。

3不適當操作

（1）在更換零件時(shí)選擇的型號有誤，接口不是很匹配，在擰緊的時(shí)候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞。

（2）樣品處理液凈化得不干凈，長(cháng)期會(huì )在六通閥和柱之間形阻塞不暢。

（3）在使用用手動(dòng)六通閥時(shí)，有些人可能由于手勁小的原因，轉動(dòng)的不到位，于是造成流路形成死堵，壓力快速升高超過(guò)警戒值。

（4）在使用金屬管路作出廢液管時(shí)，應當注意******廢液瓶中先放一些水，并把廢液管的出口端結晶成塊并造成堵塞。這種情況不常見(jiàn)，但卻的確發(fā)生過(guò)。

查堵的方法

在發(fā)生“堵”的現象后，***需要找出原因，主要是什么位置發(fā)生了“堵”。

注意，絕大多數情況下，整個(gè)系統只會(huì )有一個(gè)地方發(fā)生堵塞。查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開(kāi)，仔細觀(guān)察壓力數值，如果某一個(gè)部件（柱子除外）裝上和拆下時(shí)的壓力差別很大，可發(fā)展變化判斷。至于柱的堵塞，可以通過(guò)換同樣規格的柱的壓力是否一致來(lái)判斷。

“漏”分兩種：漏液和漏氣。

漏液，液相色譜儀從流動(dòng)相瓶到廢液瓶之間的流路是一個(gè)全封閉體系，內部壓力很高，但外部卻能******一滴不漏。如果某個(gè)部件發(fā)生漏液，那***是故障所在。漏液的原因分兩種：

1、接觸硬件不當

在更換零件如流路管或換柱時(shí)，換的接頭接口不匹配，造成漏液。要注意不同公司的柱子接頭很多是不同的，甚至同一家公司在不同時(shí)期生產(chǎn)的液相柱接頭也有很大區別。當然選項用PEEK接頭是一較好是一個(gè)較好的解決方法，不僅通用性好，而且靠手擰***能******不漏液。即使是接口本身是匹配的，但是如果操作不當也會(huì )漏液，一種不當***是力度把握不好，擰得太緊或太松；

另一種不當***是致命的錯誤：滑絲，這往往是動(dòng)手能力不太強，螺絲釘很少擰的工作者犯的錯誤，滑絲的后果不僅是漏液那么簡(jiǎn)單，常造成重要部件的報廢。解決這個(gè)問(wèn)題只能靠惡補基本功來(lái)實(shí)驗，那***是擰螺絲。

2、使用儀器不當

只要互相有10%比例***不會(huì )出現這個(gè)問(wèn)題。另一原因是在用緩沖液鹽溶液（不論甲醇含量有多少）作流動(dòng)相時(shí)，實(shí)驗結束后沒(méi)有換甲醇水沖洗，使得微滲的流動(dòng)相干燥形成晶體造成。不過(guò)，輸送泵漏液并不是非得馬上修不可，沖洗干凈并在以后的使用中多加小心一般都可以正常使用。檢測器漏液是個(gè)很麻煩的事，一般都是吸收池的問(wèn)題，更換的費用相當高。但是并不是說(shuō)一定要馬上更換，還可以從實(shí)際實(shí)驗效果看能否湊合使用。

漏氣，漏液是從內部向外漏，而漏氣則是外部了的氣體進(jìn)入液相色譜儀的流路內部形成氣泡。下面按流路的方向逐個(gè)部件分析產(chǎn)生氣泡的原因和相應解決方法。

1、過(guò)濾頭

做油液時(shí)，在流路管中有不規則但持續的小氣泡產(chǎn)生，這時(shí)考慮的是流動(dòng)相有沒(méi)有脫氣（需要特別提醒即使是有了真空脫氣機也是要先超聲脫氣的，起碼可以減少脫氣機的工作壓力并提高工作效率），如果已脫氣，則要注意過(guò)濾頭的污染也會(huì )造成這種現象。處理方法比較簡(jiǎn)單，擰下過(guò)濾頭在稀硝酸中浸泡，超聲半小時(shí)，洗凈后裝回去即可。

2、透明流路管

指的是在過(guò)濾頭和輸送泵之間的那一段管路。這一個(gè)部分往往不是有點(diǎn)氣泡，而經(jīng)常是整個(gè)管中全是空氣而操作人員卻渾然不知，以致輸送泵工作了半天才發(fā)現流動(dòng)相瓶里的液體一點(diǎn)也沒(méi)少。這也是我們常說(shuō)的液相色譜儀至少一周要開(kāi)機一次的原因（我們做液相一定要有“微滲”的概論）。如果長(cháng)時(shí)間不用，這一段管路的液體會(huì )******干掉，而充滿(mǎn)空氣的管路和充滿(mǎn)液體的管路不仔細看是分辨不出來(lái)的。這種情況對于輸送泵很危險，因為泵從設計來(lái)說(shuō)是輸送液體而不是輸送氣體，內部的液體對于活塞來(lái)說(shuō)起到了機油的作用，如果活塞桿還殘存了一些緩沖鹽，則極易拉傷，造成不可逆轉的影響。

對于這種情況，要突出“預防為主”如：液相色譜使用人員要相對固定和穩定，工作中合理搭配資源，每臺機一周至少一次實(shí)驗，如長(cháng)期不用起碼每周要沖流動(dòng)相2小時(shí)。養成良好的工作習慣很重要。

如果流路管中真漏氣了怎么辦？

我的建議是用外力使管路中充滿(mǎn)液體。

具體如下：

1、找到流路管進(jìn)入輸送泵的接頭。

2、擰下來(lái)。

3、用一干凈洗耳球的******對準管路的平整切口。

4、吸液體，看液面從流動(dòng)相瓶里上升，至離洗耳球5cm左右時(shí)停止該動(dòng)作。

5、快速把接頭擰回輸送泵上（這個(gè)過(guò)程可能會(huì )有少許流動(dòng)相外泄，這是正?，F象）。

6、開(kāi)機，打開(kāi)排液閥門(mén)，啟動(dòng)輸送泵。

7、等排液管中流出的溶液沒(méi)有氣泡時(shí)，再關(guān)閉排液閥，儀器正常工作。

3、輸送泵和柱子

這些部分進(jìn)了氣泡一般不怕，沖掉***行。

4、檢測器

應該說(shuō)，整個(gè)流路中只要有一個(gè)氣泡都會(huì )在檢測器上得到強烈的信號反映，檢測器內部的氣泡一般都能被沖走，但也有很難沖掉的殘留氣泡的情況。如果檢測器內有殘留氣泡，會(huì )有特別明顯的表現形式，***是在走基線(xiàn)時(shí)會(huì )時(shí)不時(shí)間隔出現直上直下信號很大的信號峰。這時(shí)先看普通流量能否沖走，如果沖不走，那******的辦法***是拆柱，把檢測器直接連接到輸送泵的出口，加大幾部流量沖洗，則肯定能沖走氣泡。